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動物細(xì)胞融合的方法
日期:2024-12-27 12:18
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摘要:
在體外培養(yǎng)條件下,動物細(xì)胞會自發(fā)融合,但是頻率極低。因此,一般都需要添加具有誘導(dǎo)細(xì)胞融合效應(yīng)的生物或化學(xué)藥劑,或者采用電融合技術(shù),人為地促進(jìn)細(xì)胞融合。
病毒誘導(dǎo)融合 病毒是*早采用的融合劑。常用于誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等,其中仙臺病毒*常用。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或β-丙內(nèi)酯滅活,使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性。
用滅活的仙臺病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的
優(yōu)點:融合率較高,對各種動物細(xì)胞都適宜,且仙臺病毒能在雞胚中大量繁殖,容易培養(yǎng);
缺點:仙臺病毒不穩(wěn)定,在保存過程中融合活性會降低,并且制備過程比較煩瑣。此外,病毒引進(jìn)細(xì)胞后,可能會對細(xì)胞的生命活動產(chǎn)生干擾。
聚乙二醇PEG誘導(dǎo)融合 聚乙二醇PEG具有強(qiáng)烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質(zhì)的作用,能夠有效地促進(jìn)植物原生質(zhì)體和動物細(xì)胞的融合。在不同種類的動物細(xì)胞混合液中加入聚乙二醇,就會發(fā)生細(xì)胞凝集作用;在稀釋和除去聚乙二醇的過程中,就會發(fā)生細(xì)胞融合。聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合的機(jī)理,目前還不太清楚。聚乙二醇是化學(xué)試劑,使用起來很方便,誘導(dǎo)細(xì)胞融合的頻率比較高,但是它有一定毒性,對有些細(xì)胞(如卵細(xì)胞)不適用。
細(xì)胞融合法 20世紀(jì)80年代建立起來的細(xì)胞融合技術(shù),是將兩種細(xì)胞的混合液置于低壓交流電場中,使細(xì)胞聚集成串珠狀,然后施加高壓電脈沖,以促使細(xì)胞融合。緊密排列的細(xì)胞,在相互接觸的細(xì)胞膜之間會出現(xiàn)無蛋白顆粒的脂質(zhì)區(qū),當(dāng)受到電擊時,這個區(qū)域就會被擊穿,產(chǎn)生脂雙層膜孔,導(dǎo)致細(xì)胞之間的細(xì)胞質(zhì)連通,進(jìn)而發(fā)生細(xì)胞融合。細(xì)胞融合技術(shù)有許多優(yōu)點,如誘導(dǎo)細(xì)胞融合的頻率高,對細(xì)胞無毒害作用,操作簡便,可重復(fù)性好。
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